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在進(jìn)行掃描電鏡觀察前對(duì)樣品應(yīng)該有哪些處理呢

更新時(shí)間:2020-10-13      點(diǎn)擊次數(shù):1909
  在進(jìn)行掃描電鏡觀察前,要對(duì)樣品作相應(yīng)的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結(jié)構(gòu)保存好,沒(méi)有變形和污染,樣品干燥并且有良好導(dǎo)電性能。
 
  一、樣品的初步處理
 
  (一) 取材
 
  掃描電鏡來(lái)說(shuō),樣品可以稍大些,面積可達(dá)8mm×8mm,厚度可達(dá)5mm。對(duì)于
 
  易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。
 
  (二) 樣品的清洗
 
  用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會(huì)遮蓋樣品的表面結(jié)構(gòu),影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。
 
  (三) 固定
 
  固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。也可用快速冷凍固定。
 
  (四) 脫水
 
  樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。
 
  二、樣品的干燥
 
  掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進(jìn)行。無(wú)論是水或脫水溶液,在高真空中都會(huì)產(chǎn)生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會(huì)破壞樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此,樣品在用電鏡觀察之前必須進(jìn)行干燥。
 
  三、樣品的導(dǎo)電處理
 
  生物樣品經(jīng)過(guò)脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導(dǎo)電性能也差。用掃描電鏡觀察時(shí),當(dāng)入射電子束打到樣品上,會(huì)在樣品表面產(chǎn)生電荷的積累,形成充電和放電效應(yīng),影響對(duì)圖象的觀察和拍照記錄。因此在觀察之前要進(jìn)行導(dǎo)電處理,使樣品表面導(dǎo)電。
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